干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則（試行）

（征求意見稿）

一、前言

二、干細(xì)胞制劑的質(zhì)量控制

     （一）干細(xì)胞的采集、分離及干細(xì)胞（系）的建立

     （二）干細(xì)胞制劑的制備

     （三）干細(xì)胞制劑的檢驗(yàn)

     （四）干細(xì)胞制劑的質(zhì)量研究

三、干細(xì)胞制劑的臨床前研究

     （一）安全性評(píng)價(jià)

     （二）有效性評(píng)價(jià)

名詞解釋

參考文獻(xiàn)

一、前言

       干細(xì)胞是一類具有不同分化潛能，并在非分化狀態(tài)下自我更新的細(xì)胞。干細(xì)胞治療是指應(yīng)用人自體或異體來(lái)源的干細(xì)胞經(jīng)體外操作后輸入（或植入）人體，用于疾病治療的過(guò)程。這種體外操作包括干細(xì)胞的分離、純化、擴(kuò)增、修飾、干細(xì)胞（系）的建立、誘導(dǎo)分化、凍存和凍存后的復(fù)蘇等過(guò)程。用于細(xì)胞治療的干細(xì)胞主要包括成體干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞及誘導(dǎo)的多能性干細(xì)胞（iPSC）。成體干細(xì)胞包括自體或異體、胎兒或成人不同分化組織，以及發(fā)育相伴隨的組織（如臍帶、羊膜、胎盤等）來(lái)源的造血干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、各種類型的祖細(xì)胞或前體細(xì)胞等。

       目前國(guó)內(nèi)外已開展了多項(xiàng)干細(xì)胞（指非造血干細(xì)胞）臨床應(yīng)用研究，涉及多種干細(xì)胞類型及多種疾病類型。主要疾病類型包括骨關(guān)節(jié)疾病、肝硬化、移植物宿主排斥反應(yīng)（GVHD）、脊髓損傷及退行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病和糖尿病等。其中許多干細(xì)胞類型，是從骨髓、脂肪組織、臍帶血、臍帶或胎盤組織來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞，它們具有一定的多向分化潛能及抗炎和免疫調(diào)控能力等。

       用于干細(xì)胞治療的細(xì)胞制備技術(shù)和治療方案，具有多樣性、復(fù)雜性和特殊性。但作為一種新型的生物治療產(chǎn)品，所有干細(xì)胞制劑都可遵循一個(gè)共同的研發(fā)過(guò)程，即從干細(xì)胞制劑的制備、體外試驗(yàn)、體內(nèi)動(dòng)物試驗(yàn)，到植入人體的臨床研究及臨床治療的過(guò)程。整個(gè)過(guò)程的每一階段，都須對(duì)所使用的干細(xì)胞制劑在細(xì)胞質(zhì)量、安全性和生物學(xué)效應(yīng)方面進(jìn)行相關(guān)的研究和質(zhì)量控制。

       本指導(dǎo)原則提出了適用于各類可能應(yīng)用到臨床的干細(xì)胞（除已有規(guī)定的造血干細(xì)胞移植外）在制備和臨床前研究階段的基本原則。每個(gè)具體干細(xì)胞制劑的制備和使用過(guò)程，必須有嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)操作程序并按其執(zhí)行，以確保干細(xì)胞制劑的質(zhì)量可控性以及治療的安全性和有效性。每一研究項(xiàng)目所涉及的具體干細(xì)胞制劑，應(yīng)根據(jù)本指導(dǎo)原則對(duì)不同階段的基本要求，結(jié)合各自干細(xì)胞制劑及適應(yīng)癥的特殊性，準(zhǔn)備、申請(qǐng)并實(shí)施相關(guān)的干細(xì)胞臨床前研究。

二、干細(xì)胞制劑的質(zhì)量控制

（一）干細(xì)胞的采集、分離及干細(xì)胞（系）的建立

1.對(duì)干細(xì)胞供者的要求

       每一干細(xì)胞制劑都須具有包括供者信息在內(nèi)的、明確的細(xì)胞制備及生物學(xué)性狀信息。作為細(xì)胞制備信息中的重要內(nèi)容之一，需提供干細(xì)胞的獲取方式和途徑以及相關(guān)的臨床資料，包括供者的一般信息、既往病史、家族史等。既往史和家族史要對(duì)遺傳病(單基因和多基因疾病,包括心血管疾病和腫瘤等）相關(guān)信息進(jìn)行詳細(xì)采集。對(duì)用于異體干細(xì)胞臨床研究的供者，必須經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)篩選證明無(wú)人源特定病毒（包括HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、CMV等）的感染，無(wú)梅毒螺旋體感染。必要時(shí)需要收集供者的ABO血型、HLA-I類和II類分型資料，以備追溯性查詢。如使用體外授精術(shù)產(chǎn)生的多余胚胎作為建立人類胚胎干細(xì)胞系的主要來(lái)源，須能追溯配子的供體，并接受篩選和檢測(cè)。不得使用既往史中患有嚴(yán)重的傳染性疾病和家族史中有明確遺傳性疾病的供者作為異體干細(xì)胞來(lái)源。

       自體來(lái)源的干細(xì)胞供者，根據(jù)干細(xì)胞制劑的特性、來(lái)源的組織或器官，以及臨床適應(yīng)癥，可對(duì)供體的質(zhì)量要求和篩查標(biāo)準(zhǔn)及項(xiàng)目進(jìn)行調(diào)整。

2.干細(xì)胞采集、分離及干細(xì)胞（系）建立階段質(zhì)量控制的基本要求。

       應(yīng)制定干細(xì)胞采集、分離和干細(xì)胞（系）建立的標(biāo)準(zhǔn)操作及管理程序，并在符合GMP要求基礎(chǔ)上嚴(yán)格執(zhí)行。標(biāo)準(zhǔn)操作程序應(yīng)包括操作人員培訓(xùn)；材料、儀器、設(shè)備的使用和管理；干細(xì)胞的采集、分離、純化、擴(kuò)增和細(xì)胞（系）的建立；細(xì)胞保存、運(yùn)輸及相關(guān)保障措施，以及清潔環(huán)境的標(biāo)準(zhǔn)及常規(guī)維護(hù)和檢測(cè)等。

       為盡量減少不同批次細(xì)胞在研究過(guò)程中的變異性，研究者在干細(xì)胞制劑的制備階段應(yīng)對(duì)來(lái)源豐富的同一批特定代次的細(xì)胞建立多級(jí)的細(xì)胞庫(kù)，如主細(xì)胞庫(kù)（MasterCell Bank)和工作細(xì)胞庫(kù)（WorkingCell Bank）。細(xì)胞庫(kù)中細(xì)胞基本的質(zhì)量要求，是需有明確的細(xì)胞鑒別特征，無(wú)外源微生物污染。

       在干細(xì)胞的采集、分離及干細(xì)胞（系）建立階段，應(yīng)對(duì)自體來(lái)源的、未經(jīng)體外復(fù)雜操作的干細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞鑒別、成活率及生長(zhǎng)活性、外源致病微生物，以及基本的干細(xì)胞特性檢測(cè)。而對(duì)異體來(lái)源的干細(xì)胞，或經(jīng)過(guò)復(fù)雜的體外培養(yǎng)和操作后的自體來(lái)源的干細(xì)胞，以及直接用于臨床前及臨床研究的細(xì)胞庫(kù)（如工作庫(kù)）中的細(xì)胞，除進(jìn)行上述檢測(cè)外，還應(yīng)進(jìn)行全面的內(nèi)外源致病微生物、詳細(xì)的干細(xì)胞特性檢測(cè)，以及細(xì)胞純度分析。干細(xì)胞特性包括特定細(xì)胞表面標(biāo)志物群、表達(dá)產(chǎn)物和分化潛能等。

（二）干細(xì)胞制劑的制備

1.培養(yǎng)基

       干細(xì)胞制劑制備所用的培養(yǎng)基成分應(yīng)有足夠的純度并符合無(wú)菌、無(wú)致病微生物及內(nèi)毒素的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),殘留的培養(yǎng)基對(duì)受者應(yīng)無(wú)不良影響；在滿足干細(xì)胞正常生長(zhǎng)的情況下，不影響干細(xì)胞的生物學(xué)活性，即干細(xì)胞的“干性”及分化能力。在干細(xì)胞制劑制備過(guò)程中，應(yīng)盡量避免使用抗生素。

       若使用商業(yè)來(lái)源培養(yǎng)基，應(yīng)選擇有資質(zhì)的生產(chǎn)商并由其提供培養(yǎng)基的組成成分資料及相關(guān)質(zhì)量合格證明。必要時(shí)，應(yīng)由專業(yè)檢定機(jī)構(gòu)對(duì)每批培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，并出具檢驗(yàn)報(bào)告。

       除特殊情況外，應(yīng)盡可能避免在干細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中使用人源或動(dòng)物源性血清，不得使用同種異體人血清或血漿。如必須使用動(dòng)物血清，應(yīng)確保其無(wú)特定動(dòng)物源性病毒污染。嚴(yán)禁使用海綿體狀腦病流行區(qū)來(lái)源的牛血清。

       若培養(yǎng)基中含有人的血液成份，如白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和各種細(xì)胞因子等，應(yīng)明確其來(lái)源、批號(hào)、質(zhì)量檢定合格報(bào)告，并盡量采用國(guó)家已批準(zhǔn)的可臨床應(yīng)用的產(chǎn)品。

2.滋養(yǎng)層細(xì)胞

       用于體外培養(yǎng)和建立胚胎干細(xì)胞及iPS細(xì)胞的人源或動(dòng)物源的滋養(yǎng)層細(xì)胞，需根據(jù)外源性細(xì)胞在人體中使用所存在的相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素，對(duì)細(xì)胞來(lái)源的供體、細(xì)胞建立過(guò)程引入外源致病微生物的風(fēng)險(xiǎn)等進(jìn)行相關(guān)的檢驗(yàn)和質(zhì)量控制。建議建立滋養(yǎng)層細(xì)胞的細(xì)胞庫(kù)，并按細(xì)胞庫(kù)檢驗(yàn)要求進(jìn)行全面檢驗(yàn)，特別是對(duì)人源或動(dòng)物源特異病毒的檢驗(yàn)。

3.干細(xì)胞制劑的制備工藝

       應(yīng)制定干細(xì)胞制劑制備工藝的標(biāo)準(zhǔn)操作流程及每一過(guò)程的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）并定期審核和修訂；干細(xì)胞制劑的制備工藝包括干細(xì)胞的采集、分離、純化、擴(kuò)增和傳代，干細(xì)胞（系）的建立、向功能性細(xì)胞定向分化，培養(yǎng)基、輔料和包材的選擇標(biāo)準(zhǔn)及使用，細(xì)胞凍存、復(fù)蘇、分裝和標(biāo)記，以及殘余物去除等。

       從整個(gè)制劑的制備過(guò)程到輸入（或植入）到受試者體內(nèi)全過(guò)程，需要追蹤觀察并詳細(xì)記錄。對(duì)不合格并需要丟棄的干細(xì)胞制劑，需對(duì)丟棄過(guò)程進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)管理和記錄。對(duì)于剩余的干細(xì)胞制劑必須進(jìn)行合法和符合倫理要求的處理，包括制定相關(guān)的SOP并嚴(yán)格執(zhí)行。干細(xì)胞制劑的相關(guān)資料需建檔并長(zhǎng)期保存。

       應(yīng)對(duì)制劑制備的全過(guò)程，包括細(xì)胞收獲、傳代、操作、分裝等，進(jìn)行全面的工藝研究和驗(yàn)證，制定合適的工藝參數(shù)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，確保對(duì)每一過(guò)程的有效控制。

（三）干細(xì)胞制劑的檢驗(yàn)

1.干細(xì)胞制劑質(zhì)量檢驗(yàn)的基本要求

       為確保干細(xì)胞治療的安全性和有效性，每批干細(xì)胞制劑均須符合現(xiàn)有干細(xì)胞知識(shí)和技術(shù)條件下全面的質(zhì)量要求。制劑的檢驗(yàn)內(nèi)容，須在本指導(dǎo)原則的基礎(chǔ)上，參考國(guó)內(nèi)外有關(guān)細(xì)胞基質(zhì)和干細(xì)胞制劑的質(zhì)量控制指導(dǎo)原則，從生物技術(shù)產(chǎn)品、細(xì)胞制品和治療性干細(xì)胞產(chǎn)品三個(gè)層次綜合考慮，進(jìn)行全面的細(xì)胞質(zhì)量、安全性和有效性的檢驗(yàn)。同時(shí)，根據(jù)細(xì)胞來(lái)源及特點(diǎn)、體外處理程度和臨床適應(yīng)癥等不同情況，對(duì)所需的檢驗(yàn)內(nèi)容做必要調(diào)整。另外，隨著對(duì)干細(xì)胞知識(shí)和技術(shù)認(rèn)識(shí)的不斷增加，細(xì)胞檢驗(yàn)內(nèi)容也應(yīng)隨之不斷更新。

       針對(duì)不同類型的干細(xì)胞制劑，根據(jù)對(duì)輸入或植入人體前誘導(dǎo)分化的需求，須對(duì)未分化細(xì)胞和終末分化細(xì)胞分別進(jìn)行必要的檢驗(yàn)。對(duì)胚胎干細(xì)胞和iPS細(xì)胞制劑制備過(guò)程中所使用的滋養(yǎng)細(xì)胞，根據(jù)其細(xì)胞來(lái)源，也需進(jìn)行針對(duì)相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素的質(zhì)量控制和檢驗(yàn)。

       為確保制劑的質(zhì)量及其可控性,干細(xì)胞制劑的檢驗(yàn)可分為質(zhì)量檢驗(yàn)和放行檢驗(yàn)。質(zhì)量檢驗(yàn)是為保證干細(xì)胞經(jīng)特定體外處理后的安全性、有效性和質(zhì)量可控性而進(jìn)行的較全面質(zhì)量檢驗(yàn)。放行檢驗(yàn)是在完成質(zhì)量檢驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)每一類型的每一批次干細(xì)胞制劑，在臨床應(yīng)用前所應(yīng)進(jìn)行的相對(duì)快速和簡(jiǎn)化的細(xì)胞檢驗(yàn)。

       為確保制劑工藝和質(zhì)量的穩(wěn)定性，須對(duì)多批次干細(xì)胞制劑進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)；在制備工藝、場(chǎng)地或規(guī)模等發(fā)生變化時(shí)，需重新對(duì)多批次干細(xì)胞制劑進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)。制劑的批次是指由同一供體、同一組織來(lái)源、同一時(shí)間、使用同一工藝采集和分離或建立的干細(xì)胞。對(duì)胚胎干細(xì)胞或iPS細(xì)胞制劑，應(yīng)視一次誘導(dǎo)分化所獲得的可供移植的細(xì)胞為同一批次制劑。對(duì)需要由多個(gè)供體混合使用的干細(xì)胞制劑，混合前應(yīng)視每一獨(dú)立供體或組織來(lái)源在相同時(shí)間采集的細(xì)胞為同一批次細(xì)胞。

       對(duì)于由不同供體或組織來(lái)源的、需要混合使用的干細(xì)胞制劑，必須提供所有獨(dú)立來(lái)源的細(xì)胞，在細(xì)胞質(zhì)量、免疫原性和生物學(xué)活性等方面均一性資料，以盡可能避免混合細(xì)胞制劑可能具有的危險(xiǎn)因素。

2.細(xì)胞檢驗(yàn)

2.1質(zhì)量檢驗(yàn)

（1）細(xì)胞鑒別

       應(yīng)通過(guò)細(xì)胞形態(tài)、遺傳學(xué)、代謝酶亞型譜分析、表面標(biāo)志物及特定基因表達(dá)產(chǎn)物等檢測(cè)，對(duì)不同供體及不同類型的干細(xì)胞進(jìn)行綜合的細(xì)胞鑒別。

（2）存活率及生長(zhǎng)活性

       采用不同的細(xì)胞生物學(xué)活性檢測(cè)方法，如活細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞倍增時(shí)間、細(xì)胞周期、軟瓊脂糖膠內(nèi)克隆形成率、端粒酶活性等，判斷細(xì)胞活性及生長(zhǎng)狀況。

（3）純度和均一性

       通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物、遺傳多態(tài)性及特定生物學(xué)活性等，對(duì)制劑進(jìn)行細(xì)胞純度或均一性的檢測(cè)。對(duì)胚胎干細(xì)胞及iPS細(xì)胞植入人體前的終末誘導(dǎo)分化產(chǎn)物，必須進(jìn)行細(xì)胞純度和/或分化均一性的檢測(cè)。 對(duì)于需要混合使用的干細(xì)胞制劑，需提供各獨(dú)立細(xì)胞來(lái)源之間細(xì)胞表面標(biāo)志物、細(xì)胞活性、裝量、純度和生物學(xué)活性均一性的證據(jù)及標(biāo)準(zhǔn)。

（4）無(wú)菌試驗(yàn)和支原體檢測(cè)

       應(yīng)依據(jù)現(xiàn)行版《中華人民共和國(guó)藥典》中的生物制品無(wú)菌試驗(yàn)和支原體檢測(cè)規(guī)程，對(duì)細(xì)菌、真菌及支原體污染進(jìn)行檢測(cè)。

（5）細(xì)胞內(nèi)外源致病因子的檢測(cè)

       應(yīng)結(jié)合體內(nèi)和體外方法，根據(jù)每一細(xì)胞制劑的特性進(jìn)行人源及動(dòng)物源性特定致病因子的檢測(cè)。人源特定病毒包括HIV、HBV、HCV、EBV、CMV等；如使用過(guò)牛血清，須進(jìn)行牛源特定病毒的檢測(cè)；如使用胰酶等豬源材料，應(yīng)至少檢測(cè)豬源細(xì)小病毒；如胚胎干細(xì)胞和iPS細(xì)胞在制備過(guò)程中使用動(dòng)物源性滋養(yǎng)細(xì)胞，需進(jìn)行細(xì)胞來(lái)源相關(guān)特定動(dòng)物源性病毒的全面檢測(cè)。另外還應(yīng)檢測(cè)逆轉(zhuǎn)錄病毒。

（6）內(nèi)毒素檢測(cè)

       應(yīng)依據(jù)現(xiàn)行版《中華人民共和國(guó)藥典》中的內(nèi)毒素檢測(cè)規(guī)程，對(duì)內(nèi)毒素進(jìn)行檢測(cè)。

（7）異常免疫學(xué)反應(yīng)

       檢測(cè)異體來(lái)源干細(xì)胞制劑對(duì)人總淋巴細(xì)胞增殖和/或?qū)Σ煌馨图?xì)胞亞群增殖能力的影響，或?qū)ο嚓P(guān)細(xì)胞因子分泌的影響，以檢測(cè)干細(xì)胞制劑可能引起的異常免疫反應(yīng)。

（8）致瘤性

       對(duì)于異體來(lái)源的干細(xì)胞制劑或經(jīng)體外復(fù)雜操作的自體干細(xì)胞制劑，須通過(guò)免疫缺陷動(dòng)物體內(nèi)致瘤試驗(yàn)，檢驗(yàn)細(xì)胞的致瘤性。

（9）生物學(xué)效力試驗(yàn)

       可通過(guò)檢測(cè)干細(xì)胞分化潛能、誘導(dǎo)分化細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和生理功能、對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)能力、分泌特定細(xì)胞因子、表達(dá)特定基因和/或蛋白等功能，判斷干細(xì)胞制劑與治療相關(guān)的生物學(xué)有效性。

       對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞，無(wú)論何種來(lái)源，應(yīng)進(jìn)行體外多種類型細(xì)胞（如成脂肪細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞等）分化能力的檢測(cè)，以判斷其細(xì)胞分化的多能性（multipotency）。對(duì)未分化的胚胎干細(xì)胞和iPS細(xì)胞，須通過(guò)體外擬胚胎體形成能力，或在SCID鼠體內(nèi)形成畸胎瘤的能力，檢測(cè)其細(xì)胞分化的多能性（pluripotency）。除此以外，作為特定生物學(xué)效應(yīng)試驗(yàn)，項(xiàng)目申請(qǐng)者應(yīng)提供與其治療適應(yīng)癥相關(guān)的生物學(xué)效應(yīng)檢驗(yàn)內(nèi)容及結(jié)果。

（10）培養(yǎng)基及其他添加成分殘余量的檢測(cè)

       應(yīng)對(duì)制劑制備過(guò)程中殘余的、影響干細(xì)胞制劑質(zhì)量和安全性的成分，如牛血清蛋白、抗生素、細(xì)胞因子等進(jìn)行檢測(cè)。

2.2放行檢驗(yàn)

       項(xiàng)目申請(qǐng)者應(yīng)根據(jù)上述質(zhì)量檢驗(yàn)各項(xiàng)目中所明確的檢驗(yàn)內(nèi)容及標(biāo)準(zhǔn)，針對(duì)每一類型干細(xì)胞制劑的特性，制定放行檢驗(yàn)項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn)。放行檢驗(yàn)項(xiàng)目應(yīng)能在相對(duì)短的時(shí)間內(nèi)，反映細(xì)胞制劑的質(zhì)量及安全信息。

3.干細(xì)胞制劑的質(zhì)量復(fù)核

       細(xì)胞制劑的質(zhì)量復(fù)核包括細(xì)胞檢驗(yàn)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)復(fù)核。由中國(guó)食品藥品檢定研究院進(jìn)行細(xì)胞制劑的質(zhì)量復(fù)核，并出具檢驗(yàn)報(bào)告。為便于質(zhì)量復(fù)核，項(xiàng)目申請(qǐng)者應(yīng)向質(zhì)量復(fù)核單位提供臨床前干細(xì)胞制劑研究的綜合報(bào)告，報(bào)告內(nèi)容包括詳細(xì)的干細(xì)胞制劑制備工藝、治療適應(yīng)癥、所用輔料、包材，以及制備工藝各環(huán)節(jié)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。在進(jìn)行放行檢驗(yàn)時(shí)，項(xiàng)目申請(qǐng)者需提供以往質(zhì)量檢驗(yàn)的檢驗(yàn)報(bào)告復(fù)印件。

（四）干細(xì)胞制劑的質(zhì)量研究

       在滿足上述干細(xì)胞制劑質(zhì)量檢驗(yàn)要求的基礎(chǔ)上，建議項(xiàng)目申請(qǐng)者在申報(bào)臨床應(yīng)用前的各階段，利用不同的體外實(shí)驗(yàn)方法對(duì)干細(xì)胞制劑進(jìn)行全面的安全性、有效性及穩(wěn)定性研究。

1.干細(xì)胞制劑的質(zhì)量及特性研究

1.1生長(zhǎng)活性和狀態(tài)

       生長(zhǎng)因子依賴性的檢測(cè)：在培養(yǎng)生長(zhǎng)因子依賴性的干細(xì)胞時(shí)，需對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)行為進(jìn)行連續(xù)檢測(cè)，以判斷不同代次的細(xì)胞對(duì)生長(zhǎng)因子的依賴性。若細(xì)胞在傳代過(guò)程中，特別是在接近高代次時(shí)，失去對(duì)生長(zhǎng)因子的依賴，則不能再繼續(xù)將其視為合格的干細(xì)胞而繼續(xù)培養(yǎng)和使用。

1.2致瘤性和促瘤性

       由于大多數(shù)間充質(zhì)干細(xì)胞制劑具有相對(duì)的弱致瘤性，建議項(xiàng)目申請(qǐng)者在動(dòng)物致瘤性試驗(yàn)中，針對(duì)不同類型的干細(xì)胞，選擇必要數(shù)量的細(xì)胞和必要長(zhǎng)的觀察期。

       建議在動(dòng)物致瘤性試驗(yàn)不能有效判斷致瘤性時(shí)，有必要檢測(cè)與致瘤性相關(guān)的生物學(xué)性狀的改變，如細(xì)胞對(duì)生長(zhǎng)因子依賴性的改變、基因組穩(wěn)定性的改變、與致瘤性密切相關(guān)的蛋白（如癌變信號(hào)通路中的關(guān)鍵調(diào)控蛋白）表達(dá)水平或活性的改變、對(duì)凋亡誘導(dǎo)敏感性的改變等，以此來(lái)間接判斷干細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的可能性。

       目前，普遍認(rèn)為間充質(zhì)干細(xì)胞“不致瘤”或具有“弱致瘤性”，但不排除其對(duì)已存在腫瘤的“促瘤性”作用。因此，建議項(xiàng)目申請(qǐng)者根據(jù)各自間充質(zhì)干細(xì)胞制劑的組織來(lái)源和臨床適應(yīng)癥的不同，設(shè)計(jì)相應(yīng)的試驗(yàn)方法，以判斷其制劑的“促瘤性”。

1.3生物學(xué)效應(yīng)

       隨著研究的進(jìn)展，建議項(xiàng)目申請(qǐng)者針對(duì)臨床治療的適應(yīng)癥，不斷研究更新生物學(xué)效應(yīng)檢測(cè)方法。如研究介導(dǎo)臨床治療效應(yīng)的關(guān)鍵基因或蛋白的表達(dá)，并以此為基礎(chǔ)提出與預(yù)期的生物學(xué)效應(yīng)相關(guān)的替代性生物標(biāo)志物（surrogatebiomarker）。

2.干細(xì)胞制劑穩(wěn)定性研究及有效期的確定

       應(yīng)進(jìn)行干細(xì)胞制劑在儲(chǔ)存（液氮凍存和細(xì)胞植入前的臨時(shí)存放）和運(yùn)輸過(guò)程中的穩(wěn)定性研究。檢測(cè)項(xiàng)目應(yīng)包括細(xì)胞活性、密度、純度、無(wú)菌性等。 根據(jù)干細(xì)胞制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果，確定其制劑的保存液成份與配方、保存及運(yùn)輸條件、有效期，同時(shí)確定與有效期相適應(yīng)的運(yùn)輸容器和工具，以及合格的細(xì)胞凍存設(shè)施和條件。

3.快速檢驗(yàn)方法的研發(fā)

       項(xiàng)目申請(qǐng)者應(yīng)根據(jù)新的干細(xì)胞基礎(chǔ)及實(shí)驗(yàn)技術(shù)研究成果，針對(duì)各自干細(xì)胞制劑的特性、特定的臨床適應(yīng)癥，研發(fā)新的反映干細(xì)胞制劑質(zhì)量、安全性和有效性的快速檢驗(yàn)方法。

三、干細(xì)胞制劑的臨床前研究

       應(yīng)進(jìn)行干細(xì)胞制劑的臨床前研究，為治療方案的安全性和有效性提供支持和依據(jù)。

       在臨床前研究方案中，項(xiàng)目申請(qǐng)者應(yīng)設(shè)計(jì)和提出與適應(yīng)癥相關(guān)的疾病動(dòng)物模型，用于預(yù)測(cè)干細(xì)胞在人體內(nèi)可能的治療效果、作用機(jī)制、不良反應(yīng)、合理的輸入或植入途徑和劑量等臨床研究所需的信息。

       項(xiàng)目申請(qǐng)者應(yīng)在合適的動(dòng)物模型基礎(chǔ)上，研究和建立干細(xì)胞有效標(biāo)記技術(shù)和動(dòng)物體內(nèi)干細(xì)胞示蹤技術(shù)，以便于研究上述內(nèi)容，特別是干細(xì)胞的體內(nèi)存活、分布、歸巢、分化和組織整合等功能的研究。在綜合動(dòng)物模型研究基礎(chǔ)上，項(xiàng)目申請(qǐng)者應(yīng)對(duì)干細(xì)胞制劑的安全性和生物學(xué)效應(yīng)進(jìn)行合理評(píng)價(jià)。

（一）安全性評(píng)價(jià)

1.毒性試驗(yàn)

       可通過(guò)合適的動(dòng)物試驗(yàn)?zāi)Ｐ陀^察干細(xì)胞制劑各種可能的毒性反應(yīng)，如細(xì)胞植入時(shí)和植入后的局部和整體的毒性反應(yīng)。

       如難以采用相關(guān)動(dòng)物評(píng)價(jià)人干細(xì)胞的毒性，可考慮盡可能模擬臨床應(yīng)用方式，采用動(dòng)物來(lái)源相應(yīng)的干細(xì)胞制劑，以高于臨床應(yīng)用劑量回輸動(dòng)物體內(nèi)，觀察其毒性反應(yīng)。

2.異常免疫反應(yīng)

       對(duì)干細(xì)胞制劑特別是異體來(lái)源、經(jīng)體外傳代培養(yǎng)和特殊處理的自體或異體來(lái)源的制劑，應(yīng)通過(guò)體外及動(dòng)物試驗(yàn)評(píng)價(jià)其異常免疫反應(yīng)，包括對(duì)不同免疫細(xì)胞亞型及相關(guān)細(xì)胞因子的影響。對(duì)胚胎干細(xì)胞及iPS細(xì)胞，在體外誘導(dǎo)分化后重新表達(dá)供體的HLA抗原分子，植入體內(nèi)后可能形成的免疫排斥反應(yīng)，需進(jìn)行有效評(píng)價(jià)。

3.致瘤性

       對(duì)高代次的或經(jīng)過(guò)體外復(fù)雜處理和修飾的自體來(lái)源以及各種異體來(lái)源的干細(xì)胞制劑，應(yīng)進(jìn)行臨床前研究階段動(dòng)物致瘤性評(píng)估。建議項(xiàng)目申請(qǐng)者選擇合適的動(dòng)物模型，使用合適數(shù)量的干細(xì)胞、合理的植入途徑和足夠長(zhǎng)的觀察期，以有效評(píng)價(jià)制劑的致瘤性。

4.非預(yù)期分化

       非預(yù)期分化包括非靶細(xì)胞分化或非靶部位分化。建議項(xiàng)目申請(qǐng)者利用特定的檢測(cè)技術(shù)，在體內(nèi)動(dòng)物試驗(yàn)中研究、評(píng)估和監(jiān)控干細(xì)胞非預(yù)期分化的可能性。

（二）有效性評(píng)價(jià)

1.細(xì)胞模型（見前述-干細(xì)胞制劑的質(zhì)量研究）

2.動(dòng)物模型

       用于觀察植入的干細(xì)胞或其分化產(chǎn)物改變模型中疾病的病理進(jìn)程；研究干細(xì)胞的歸巢能力和免疫調(diào)節(jié)功能；通過(guò)分析干細(xì)胞植入后，特定細(xì)胞因子和/或特定基因表達(dá)情況，提出替代性生物學(xué)效應(yīng)標(biāo)志物。

       若所申請(qǐng)的研究方案，因目前國(guó)際上干細(xì)胞生物學(xué)知識(shí)和技術(shù)方面的局限性，無(wú)法提出有效的體內(nèi)動(dòng)物模型研究?jī)?nèi)容，則應(yīng)在立項(xiàng)依據(jù)中進(jìn)行全面細(xì)致的說(shuō)明。

名詞解釋：

       干細(xì)胞制劑（Stemcell-based medicinalproducts）：是指用于治療疾病或改善健康狀況的、以不同類型干細(xì)胞為主要成分、符合相應(yīng)質(zhì)量及安全標(biāo)準(zhǔn)，且具有明確生物學(xué)效應(yīng)的細(xì)胞制劑。

       胚胎干細(xì)胞（Embryonicstemcell）：源自第5-7天的胚胎中內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的初始（未分化）細(xì)胞，可在體外非分化狀態(tài)下“無(wú)限制地”自我更新，并且具有向三個(gè)胚層所有細(xì)胞分化的潛力，但不具有形成胚外組織（如胎盤）的能力。

       成體干細(xì)胞（Somaticstem cell）：位于各種分化組織中未分化的干細(xì)胞，這類干細(xì)胞具有有限的自我更新和分化潛力。

       間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymalstromal/stem cell，MSC）：一類存在于多種組織(如骨髓、臍帶血和臍帶組織、胎盤組織、脂肪組織等），具有多向分化潛力，非造血干細(xì)胞的成體干細(xì)胞。這類干細(xì)胞具有向多種間充質(zhì)系列細(xì)胞（如成骨、成軟骨及成脂肪細(xì)胞等）或非間充質(zhì)系列細(xì)胞分化的潛能，并具有獨(dú)特的細(xì)胞因子分泌功能。

       祖細(xì)胞（Progenitors）：一類只能向特定細(xì)胞系列分化，并且只具備有限的分裂增殖能力的成體細(xì)胞。

       前體細(xì)胞（Precursors）：一類只能向特定終末分化細(xì)胞分化的，較祖細(xì)胞更有限的增殖能力的成體細(xì)胞。

       造血干細(xì)胞（Hematopoieticstem cell）：具有高度自我更新能力和多向分化潛能的造血前體細(xì)胞，可分化成紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板和淋巴細(xì)胞。

       誘導(dǎo)的多能性干細(xì)胞（Inducedpluripotent stem cell,iPS）：一類通過(guò)基因轉(zhuǎn)染等細(xì)胞重編程技術(shù)人工誘導(dǎo)獲得的，具有類似于胚胎干細(xì)胞多能性分化潛力的干細(xì)胞。

       胚胎干細(xì)胞系（Embryonicstem cell line）：在體外培養(yǎng)的條件下，可保持未分化狀態(tài)連續(xù)增殖的胚胎干細(xì)胞。

      全能性（Totipotent）：是早期數(shù)天胚胎中，具有分化成機(jī)體所有類型細(xì)胞和形成完全胚胎能力的干細(xì)胞。

      亞全能性（Pluripotent）：是具有形成機(jī)體各種類型細(xì)胞，即所有三胚層來(lái)源細(xì)胞的能力，但不具有形成胚外胎組織細(xì)胞的能力。

      多能性（Multipotent）：是指具有形成機(jī)體內(nèi)超過(guò)一種類型細(xì)胞的能力，但往往是針對(duì)特定細(xì)胞系列的。

      滋養(yǎng)層細(xì)胞（Feederlayer）：是指通過(guò)細(xì)胞-細(xì)胞相互作用，或分泌蛋白或其他物質(zhì)，位于胚胎干細(xì)胞和iPS細(xì)胞的培養(yǎng)底層，以支持這些干細(xì)胞生長(zhǎng)的動(dòng)物源性或人源性細(xì)胞。

      畸胎瘤（Teratoma）：一種含有三個(gè)胚層組織細(xì)胞和分化的組織的良性腫瘤。

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